pET ekspresyon plazmidleri, Escherichia coli‘de yüksek seviyelerde rekombinant protein ekspresyonu için en popüler plazmidler arasındadır. Bunlar orijinal olarak 30 yıldan daha uzun bir süre önce tasarlandı. Orijinal tasarım 103 benzersiz plazmide genişletilse de, transkripsiyon ve translasyon kontrol elemanları aynı kalmıştır.

Shilling ve ve ekibi plazmit serisinin en popüler olan pET28a plazmidinin tasarımını tekrar gözden geçirdiler. İlk olarak, T7 promotörünün tam dizisini eklediler. Tam T7 konsensüs sekansının eski haline getirilmesi, protein üretiminde 3 kat artış sağlamıştır. Daha sonra, translasyon başlatma bölgesini (TIR: translation initiation region) ​​sentetik olarak geliştirdiler. Optimum ribozom bağlanması için tarama yapılarak protein üretimini 47 kata kadar arttırdılar. Birlikte, bu iki stratejik değişiklik 33-121 kat artış sağlamıştır. Bu yaklaşımın yapılması kolaydır ve diğer pET ekspresyon plazmidleri ile de kullanılabilir.

Kaynakça:

• Singh, A. Design of improved pET expression plasmids. Nat Methods 17, 655 (2020). https://doi.org/10.1038/s41592-020-0904-y