CRISRP sistemi son zamanlarda bir çok çalışmada kullanılmıştır. Bunlarda bir tanesi de kromozom üzerindeki spesifik bir lokusun görüntülenmesidir. Bunu yapmamızı sağlayan teknoloji dCas9 proteinin keşfedilmesiyle beraber gelişmiştir. Çünkü dCas9 proteinine floresan ışıma yapan proteinler eklenerek, spesifik gRNA’lar ile istenilen bölge görselleştirilebilir.

Bu sistem dCas9’ın istenilen bölgeye spesifik gRNA ile yönlendirilebilir olmasına ve spesifik bölgeye bağlandığı zaman EGFP ışıma yaparak o bölgeyi görünür kılmasına dayanmaktadır (Şekil 1-2-3).

Şekil 1. dCas9-EGFP sistemiyle görüntülenme işleminin genel basamakları

Şekil 2. dCas9-EGFP kompleksleri gRNA ile hedeflenen dizilere bağlaırlar

Şekil 3. dCas9-EGFP komplkesi daha ışıma oluşturu ve istenilen gen bölgesi kromozomun hangi bölgesinde olduğu mikroskopla görülebilir hale gelir

Aynı zamanda, bir EGFP-dCas9 füzyonunun, telomerler gibi tekrarlayan sekansları içeren DNA lokuslarını tek bir gRNA veya 5 kb’lik bir DNA bölgesine bağlanabilen 26 ila 36 gRNA kullanılarak görselleştirilmesi için kullanılabileceği de gösterilmiştir (Şekil 4-5).

Şekil 4: Spesifik genomik lokusların dCas9-EGFP sistemiyle görüntülenmesi

Şekil 5. dCas9-EGFP sistemi kullanılarak telomer bölgelerinin görüntülenmesi

Bu görüntüleme stratejisi, kromozom dinamiği ve yapısını incelemek için güçlü bir araç haline gelmiştir ve dCas9 sistemini gen ifadesine dayalı uygulamaların ötesine taşımıştır.

Kaynakça:

• Sander, J., Joung, J. CRISPR-Cas systems for editing, regulating and targeting genomes. Nat Biotechnol 32, 347–355 (2014). https://doi.org/10.1038/nbt.2842
• Chen, Baohui et al. “Dynamic imaging of genomic loci in living human cells by an optimized CRISPR/Cas system.” Cell vol. 155,7 (2013): 1479-91. doi:10.1016/j.cell.2013.12.001
• dCas9-EGFP video